Spectrophotometry yog cov txheej txheem sim siv los ntsuas qhov sib xyaw ntawm cov kuab tshuaj hauv qhov kev daws teeb meem tshwj xeeb los ntawm kev suav qhov nyiaj ntawm lub teeb nqus los ntawm cov tshuaj ntawd. Cov txheej txheem no muaj txiaj ntsig zoo vim tias qee yam sib xyaw tseem yuav nqus tau qhov sib txawv ntawm lub teeb ntawm qhov sib txawv sib txawv. Los ntawm kev txheeb xyuas lub teeb dhau los ntawm kev daws teeb meem, koj tuaj yeem txheeb xyuas cov sib xyaw uas tau yaj hauv cov tshuaj thiab lawv cov ntsiab lus. Cov cuab yeej siv los txheeb xyuas cov kev daws teeb meem nrog cov txheej txheem no hauv chav kuaj yog lub tshuab ntsuas hluav taws xob.
Kauj ruam
Ntu 1 ntawm 3: Npaj Tus Qauv
Kauj Ruam 1. Qhib lub spectrophotometer
Feem ntau cov spectrophotometers yuav tsum tau ua kom sov ua ntej lawv tuaj yeem ntsuas qhov tseeb. Yog li, pib lub tshuab thiab tom qab ntawd cia nws zaum tsawg kawg 15 feeb ua ntej ntsuas cov qauv.
Siv lub sijhawm no los npaj cov qauv
Kauj Ruam 2. Ntxuav lub khob los yog raj raj
Hauv tsev kuaj mob hauv tsev kawm ntawv, muaj cov raj siv pov tseg uas tsis tas yuav tsum tau ntxuav ua ntej. Txawm li cas los xij, yog tias koj tab tom siv lub qhov cub tsis tu ncua lossis lub raj ntsuas, nco ntsoov ntxuav lub cuab yeej kom huv ua ntej siv. Yaug tag nrho cov cuvettes nrog dej deionized.
- Ceev faj siv cuvettes vim lawv kim heev.
- Thaum siv lub khob iav, tsis txhob kov lub sab qhov twg lub teeb ci (feem ntau yog sab ntshiab ntawm lub ntim).
Kauj Ruam 3. Ncuav cov qauv txaus rau hauv lub khob
Qhov ntim siab tshaj plaws ntawm ib feem ntawm lub khob yog 1 ml, thaum qhov ntim siab tshaj plaws ntawm lub raj kuaj yog 5 ml. Koj qhov kev ntsuas yuav tsum raug yog tsuav lub spectrophotometer lub teeb tseem tuaj yeem hla tus qauv thiab tsis yog ib feem ntawm lub ntim.
Yog tias koj tab tom siv lub raj xa dej los ntxig cov qauv, siv cov lus qhia tshiab rau txhua tus qauv. Txoj kev ntawd, hla kev sib kis tuaj yeem zam tau
Kauj Ruam 4. Npaj txoj kev daws teeb meem
Cov kev daws teeb meem no uas tseem hu ua qhov khoob lossis qhov khoob muaj tsuas yog cov kuab tshuaj hauv qhov kev tshuaj ntsuam xyuas. Piv txwv li, yog tias koj muaj cov qauv ntawm ntsev yaj hauv dej, qhov kev daws teeb meem uas koj xav tau yog dej. Yog tias cov dej uas koj siv yog xim liab, koj yuav tsum siv cov kua liab liab. Siv lub thawv zoo sib xws los tuav cov tshuaj dawb hauv tib ntim ib yam li cov qauv.
Kauj Ruam 5. So sab nraum lub qhov cub
Ua ntej tso lub cuvette rau hauv lub spectrophotometer, koj yuav tsum xyuas kom nws huv si kom tsis txhob cuam tshuam nrog kev ntsuas vim muaj hmoov av lossis tsis huv. Siv daim ntaub uas tsis muaj lint tshem tawm cov dej me me los yog hmoov av ua rau sab nrauv ntawm lub khob.
Ntu 2 ntawm 3: Kev sim
Kauj Ruam 1. Txiav txim siab thiab kho lub wavelength ntawm lub teeb los tshuaj xyuas cov qauv
Siv ib lub wavelength ntawm lub teeb (nqaj monochromatic) txhawm rau txhawm rau ntsuas kev ua tau zoo. Xaiv cov xim ntawm lub teeb uas tuaj yeem nqus tau los ntawm cov tshuaj lom neeg uas xav tias yuav yaj hauv cov qauv ntsuas. Teem lub nthwv dej raws li qhov tshwj xeeb ntawm spectrophotometer koj siv.
- Hauv tsev kuaj mob hauv tsev kawm ntawv, feem ntau cov yoj yoj yoj no feem ntau yuav muab rau hauv cov lus qhia sim.
- Vim tias qhov piv txwv yuav cuam tshuam txhua lub teeb pom kev, lub nthwv dej ntawm kev sim lub teeb xim feem ntau ib txwm txawv ntawm cov qauv xim.
- Ib yam khoom zoo li muaj xim tshwj xeeb vim tias nws cuam tshuam txog qee qhov nthwv dej thiab nqus tag nrho lwm cov xim. Nyom tshwm ntsuab vim tias chlorophyll hauv nws cuam tshuam ntsuab thiab nqus tau lwm cov xim.
Kauj Ruam 2. Calibrate lub spectrophotometer nrog cov tshuaj dawb
Muab cov tshuaj dawb tso rau hauv lub khob tuav thiab kaw lub tshuab tsom iav. Ntawm lub vijtsam sib piv spectrophotometer, muaj rab koob uas yuav txav mus raws qhov ntsuas qhov pom pom pom. Tom qab muab cov tshuaj dawb tso rau, rab koob yuav tsum txav mus rau sab xis. Sau tus nqi no thaum koj xav tau tom qab. Cia qhov kev daws teeb meem tsis nyob twj ywm hauv lub tshuab ntsuas hluav taws xob, tom qab ntawd xaub rab koob mus rau xoom siv lub pob qhov hloov kho.
- Digital spectrophotometers kuj tuaj yeem ntsuas ib yam nkaus. Txawm li cas los xij, cov cuab yeej no tau nruab nrog lub vijtsam digital. Teem kev nyeem cov tshuaj dawb mus rau 0 nrog cov pob tswj.
- Txawm hais tias qhov kev daws teeb meem dawb raug tshem tawm ntawm lub tshuab ntsuas hluav taws xob, qhov ntsuas ntsuas tseem yuav siv tau. Yog li, thaum koj ntsuas tag nrho cov qauv, qhov nqus ntawm qhov khoob yuav raug txo kom tsawg.
Kauj Ruam 3. Tshem tawm qhov tsis muaj dab tsi thiab sim ntsuas qhov ntsuas qhov ntsuas pom
Txawm tias tom qab qhov kev daws teeb meem dawb raug tshem tawm los ntawm lub tshuab tsom iav, rab koob lossis tus lej ntawm lub vijtsam yuav tsum tseem nyeem 0. Muab cov tshuaj dawb tso rov qab rau hauv lub tshuab tsom iav thiab xyuas kom tseeb tias kev nyeem ntawv tsis hloov. Yog tias lub tshuab ntsuas hluav taws xob ntsuas tau zoo siv qhov kev daws teeb meem dawb, qhov tshwm sim ntawm lub vijtsam tseem yuav yog 0.
- Yog tias rab koob lossis tus lej ntawm lub vijtsam tsis nyeem 0, rov ua cov kauj ruam ntsuas nrog kev daws teeb meem.
- Yog tias qhov teeb meem tseem nyob, nrhiav kev pab lossis muaj ib tus neeg tshuaj xyuas lub tshuab tsom iav.
Kauj Ruam 4. Ntsuas qhov nqus ntawm cov qauv
Tshem qhov kev daws teeb meem uas tsis muaj dab tsi thiab ntxig cov qauv coj mus rau hauv spectrophotometer. Tos txog 10 vib nas this rau txhais tes kom ruaj khov lossis cov lej ntawm cov duab tso tawm kom tsis txhob hloov pauv. Sau qhov feem pua kev sib kis thiab/lossis nqus tau ntawm tus qauv.
- Qhov ntau lub teeb uas dhau mus, lub teeb pom kev tsawg dua. Feem ntau, koj yuav tsum sau tus nqi nqus ntawm cov qauv uas feem ntau qhia ua tus lej lej, piv txwv li 0.43.
- Rov ntsuas qhov ntsuas ntawm txhua qhov piv txwv tsawg kawg peb zaug thiab tom qab ntawd suav qhov nruab nrab. Txoj kev ntawd, cov txiaj ntsig koj tau txais yuav raug ntau dua.
Kauj Ruam 5. Rov ua dua qhov kev sim nrog qhov sib txawv ntawm lub teeb
Koj tus qauv yuav muaj ntau qhov sib txuas uas muaj qhov nqus sib txawv nyob ntawm qhov nthwv dej ntawm lub teeb. Txhawm rau txo qhov tsis paub tseeb, rov ntsuas cov qauv ntawm 25 nm nthwv dej sib nrug nyob thoob lub teeb pom kev zoo. Txoj kev no, koj tuaj yeem tshawb pom lwm yam tshuaj lom neeg yaj hauv cov qauv.
Ntu 3 ntawm 3: Txheeb Xyuas Cov Ntaub Ntawv Nquag Nqis
Kauj Ruam 1. Xam qhov kev sib kis thiab kev nqus ntawm cov qauv
Kev sib kis yog ntau npaum li cas lub teeb tuaj yeem hla dhau tus qauv thiab mus txog lub spectrophotometer. Lub caij no, kev nqus dej yog qhov pom kev ntau npaum li cas los ntawm ib qho ntawm cov tshuaj yaj hauv cov qauv. Muaj ntau ntau niaj hnub spectrophotometers muab cov khoom tso rau hauv daim ntawv ntawm kev sib kis thiab nqus tau. Txawm li cas los xij, yog tias koj tau txais lub teeb pom kev zoo, koj tseem tuaj yeem suav ob qhov txiaj ntsig koj tus kheej.
- Kev sib kis (T) tuaj yeem txiav txim siab los ntawm kev faib qhov sib zog ntawm lub teeb dhau los ntawm cov qauv piv txwv los ntawm cov teeb pom kev dhau los ntawm cov tshuaj dawb paug. Tus nqi no feem ntau yog qhia ua lej lossis feem pua. T = kuv/kuv0, qhov twg kuv yog qhov piv txwv siv thiab kuv0 yog qhov siv tsis tau.
- Kev nqus tau (A) yog qhia raws li qhov tsis zoo hauv paus 10 logarithm (nthuav tawm) kev sib kis: A = -log10T. Yog li, yog T = 0, 1, A = 1 (0, 1 yog 10 rau lub zog ntawm -1). Qhov no txhais tau tias 10% ntawm lub teeb dhau, thaum 90% yog nqus. Lub caij no, yog T = 0.01, A = 2 (0.01 yog 10 rau lub zog -2). Qhov no txhais tau tias, lub teeb uas dhau mus yog 0.1%.
Kauj Ruam 2. Teeb tus nqi nqus nqus vs. wavelength
Qhia tus nqi nqus raws li y-axis thiab yoj yoj raws li x-axis. Los ntawm cov dots ntawm txhua qhov txiaj ntsig tau txais txiaj ntsig hauv txhua qhov nthwv dej, koj yuav tau txais qhov nqus tau ntawm cov qauv, thiab txheeb xyuas cov ntsiab lus ntawm cov khoom sib xyaw thiab nws qhov piv hauv cov qauv.
Kev nqus tau nqus feem ntau muaj qhov siab ntawm qee qhov nthwv dej. Cov yoj yoj yoj ncov ncov saum toj no tso cai rau koj txheeb xyuas cov sib txuas tshwj xeeb
Kauj Ruam 3. Sib piv koj qhov nqus tau nqus nrog cov duab ntawm cov khoom paub
Txhua qhov sib xyaw muaj qhov tshwj xeeb nqus tau ib puag ncig thiab ib txwm muaj tib lub sijhawm nthwv dej zoo ib yam hauv txhua qhov kev ntsuas. Los ntawm kev sib piv cov duab koj tau txais nrog cov duab kab ntawm cov paub sib xyaw, koj tuaj yeem txheeb xyuas cov ntsiab lus daws teeb meem hauv cov qauv piv txwv.
